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[洁净空调系统] 生物医学洁净技术专题讲座(续一)微生物气溶胶的采样(讲座二)

生物医学洁净技术专题讲座(续一)微生物气溶胶的采样(讲座二)

洁净技术从电子工业转向生物医学,由于知识领域的
差异,形成了许多误区。因此,从事工业洁净化工程的人员
就要加强学习,转变观念,提高设计和施工质量。特别是更
要加强交叉学科的学习。
在生物医学洁净技术中,关于空气微生物气溶胶的采
样,确实出现了许多重大技术问题。有的医院与施工单位
在验收工程时发生矛盾;有的认为生物医学洁净室比工业
洁净室简单;只要测一下空气尘粒即可,甚至觉得只要静态
监测合格,就可放心使用了。上述现象说明对微生物采样
缺乏应有的认识,现从五个方面介绍空气微生物采样的知
识。
1 微生物气溶胶采样的应用
没有微生物气溶胶的采样就没有空气微生物学。一般
在以下几种情况时需要采样。
(1)生物医学洁净工程验收。像B 实验室、一级到几
十万级洁净室以及其它防护工程的验收等。
(2)过滤器过滤效率的检验。用于生物医学的过滤器,
必须对微生物的过滤效率测试,国外用病毒来检验过滤效
率,我国尚没有一家工厂进行此项检测,严格地讲,是不符
合程序的。
(3)新旅游景区的开放。开放新的旅游景区首先要检
查是否有病原微生物存在。否则会造成重大疾病的流行。
欧洲的阿尔卑斯山山洞由于住着带狂犬病毒的蝙蝠,使人
发病死亡就是最典型的例子。
(4)公共场所空气卫生标准的检验。如对宾馆、剧场、
影院、地铁、医院等卫生标准的检验。
(5)新的病原菌检测。当流行一种新的空气传播的病
菌,首先要对空气进行采样如军团菌的发现。
(6)生物战剂的检测。由于微生物气溶胶具有制造简
便,散布面积广,易感染,不易被发现等特点,因此,生物战
剂大多以气溶胶的形式释放。恐怖分子在美国等地散发炭
疽粉末,而不散发水剂,原因就在于此。因此,要发现、检
验、留样、划分污染范围都要对生物战剂进行气溶胶的采

2 微生物气溶胶采样的基本原理及仪器
微生物气溶胶采样的原理有七种,我们推荐的最合适
的采样器有四种。
(1)撞击法(Impacfion)。微生物气溶胶粒子获得足够的
动量在惯性力的作用下,就会脱离气流撞击在收集表面上。
这种采样器种类很多,如安德森(Andemen)采样器;也是我
们推荐的采样器之一。
(2)离心法(Centrifugation)。这是一种有涡壳、叶轮的特
殊采样器,借助涡壳内叶轮高速旋转,带菌粒子由于离心力
作用,冲击到培养基条上,经过培养,最后进行菌落计数。
此类型的采样器,国际上有RCS型,国内有LWC—I型。由
于它的优点多,用量最大。这是我们推荐的采样器之二。
(3)气旋法(Cyclone scrubbing)。把微生物气溶胶以直
角切线方向引入一种连续的液态膜上,借助离心力和冲洗,
撞击在容器壁上。再将该液体培养、计数。这是我们推荐
的采样器之三。
(4)冲击法(Impingement)。此法是将高速的带菌粒子
冲击到液体里。它与撞击法的最大区别是前者的收集面是
固体,此法的收集面是液体。它的典型代表是全玻璃液体
冲击采样器(An Glass Impinger,AGI),也是我们推荐的采样
器之四。
(5)过滤法(Filtration)。它是将空气中的微生物靠物理
阻挡的方法把它过滤到滤材上,如滤纸、棉花、玻璃纤维或
可溶性结晶物上,然后洗下,或结晶物溶化(例如谷氨酸).
再去培养、计算菌数。
(6)静电沉降法(Electrostatic Precepitation)。把细菌气溶
胶粒子通过高压静电沉降在湿表面上的采样原理。已应用
于大容量采样器(Litton Moder MLVAS和LEAP),为了检测低
浓度空气病毒设计的。
(7)自然沉降法(Sedimentation)。利用重力,将空气中的
带菌粒子直接沉降在培养基上,此法是前苏联奥梅良斯基
提出的,即:细菌浓度=50000N/At N:平皿上菌数A:平
皿面积t:沉降时间
此法最简单,应用最广,但可靠性、科学性不够

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Re:楼主

3 微生物气溶胶采样介质
(1)微生物气溶胶采样介质的概念。要采集空气中的
微生物,除了有高效广谱采样器外,还必须有一种较好的采
样介质。什么是空气微生物采样介质?狭义来讲,就是用
来捕获空气微生物的物质。但还必须再转移到培养基上,
再进行生长、计数、鉴定等一系列观察。广义地讲,空气微
生物采样介质也包括培养基。为了方便,此处把需要再转
种的采样物质称为空气微生物采样介质;把可直接在其上
显示空气微生物集落或噬斑的物质称为培养基。
(2)微生物气溶胶采样介质的性能。在采样的研究中,
采样器同采样介质是结伴同行。没有一种只有采样器而没
有采样介质的采样;也没有一种只有介质而没有采样器的
技术。为了把空气微生物采集下来,具有如下特性的,才算
理想的介质。①稳定性高,② 粘附性强,③ 无毒性,④ 防干
燥,⑤可溶性好。
4 影响微生物气溶胶采样的因素
要获得一次成功的采样并不容易,因为影响因素很多,
主要有:
(1)采样器的捕获率。捕获率对采样的成功与否影响
很大,有的捕获率是另一种的几十倍。
(2)采样器的特性。有些采样器采大粒子捕获率高,有
些采小粒子捕获率高,因此要对采样器的性能很好了解,才
会有的放矢地用好采样器。
(3)采样的流量。在空气中要采到某些病原菌,就像大
海捞针。因此要想采样取得阳性结果就要进行大流量的采
样,这样捕获到目的菌的几率就高。
(4)采样用的介质。同样的采样方法,但不同的培养基
或采样介质,可以得到完全不同的结果。要想获得采样成
功,必须要对采样介质认真进行了解,合理使用。
(5)培养条件。不同空气微生物要求的培养条件亦不
同。嗜热芽胞杆菌要在70℃ 以上温度培养,常见致病菌
37℃培养,霉菌26—28℃ 。除了温度,有的还要求一定的湿
度。在非常干燥的条件下,霉菌是不会生长的。有的病毒
还要求有活细胞才能生长出来。
5 微生物气溶胶采样的发展趋势
任何都要求保证标本尽可能反映原始材料状态。这是
总要求,但到目前为止,还没有一种采样技术能满足这一要
求,我们所做的一切正是向这个方向努力。空气微生物采
样目前有5种发展趋势:
(1)复合式的空气微生物采样原理。实践证明,许多采
样用单一的采样原理是无法完成的,因而,复合式采样原理
的应用是空气微生物采样的一个重要倾向。
(2)大流量的空气微生物采样装置。空气中,许多病原
菌的含量极低,据测脑膜炎球菌在室内浓度仅为
lefia/28.3m3
,小流量的采样器很难采到。大流量采样器的
研制是近代发展的方向。


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Re:楼主

(3)/1'的活性粒子的空气微生物采样技术。自20世纪
中叶,核酸、蛋白质结构的研究成果,促进了空气生物学的
发展,因此Here JF.ph明确指出:自第三届国际空气微生物
学会议(1969)以后,对病毒等小生物活性粒子的研究应该
加强。
(4)联合的空气微生物采样措施。空气微生物种类繁
多,数量变化大,采集它的方法更是多种多样。原则只有一
个,能100%地采到并显示它们的活力。为此提出联合的空
气微生物采样措施,忽视了采样过程中的任一细节,都会造
成采样的失败。联合的采样措施就是据此提出来的。
(5)快速自动的空气微生物采样的途径。空气微生物
采样后,如能快速自动的鉴定,早期报警将是最理想的结
果,这是专家们一致的奋斗目标。当然由于技术上要求高,
既要快又要准确、敏感,还要自动化,因而相当复杂。特别
是机械制造要求的精度极高,真正能拿出成果的不多。这
里有几个难点必须解决。一是连续采样,二是标本的分离,
三是微生物的快、敏、准的检出,四是高度自动化。
一些快速侦检方法:① 侦检活微生物 玻片培养、
NASA WOLF捕获器、测定Mco2、测定监PO4的摄影。② 广谱
侦察化学发光、生物发光、颗粒染色器。③ 特异鉴定免
疫荧光吸附、放射抗体测定、气液相色谱(生物、产物)色谱
与质量光谱(裂解物)。
几种快速侦检空气微生物的仪器:①Wolf捕获器:是一
种实用的自动微生物侦检器。原理是将采到的微生物放入
液体培养基中培养,以散射光感应DH的变化为线索,查出
微生物的生长。它是美国航空与外层空间管理局(NASA)
研制的。②Gulliver侦察仪:几分到几小时可检出。以微生
物代谢产物“co2为线索,此亦NASA研制。③ 颗粒染色
仪:原理是将采到的标本用乙基紫蛋白染色。细菌染成蓝
色,灰尘染成绿色。用光电管相对脉冲数来测定这两种标
本并报警。④ 生物发光荧光素加细菌的ATP在 存在时,
在荧光素酶作用下即可发光。用光强与ATP成正比来报
警。敏感度可达1 一1a6个菌/ml。⑤x咐8生物战剂侦察报
警仪:它利用化学发光原理,即Iamainol--~碱性条件/hi-啉
(菌体器)一发光
⑥ 红外光生物气溶胶侦检仪:其原理是利用红外分光光度
探测大气中蛋白质(微生物体)浓度的异常升高。BAq—I
型侦检仪灵敏度高达0.1pg/L,时间5min。近来还有气相色
谱、免疫荧光等技术途径,对用于快速自动鉴定微生物都有
极大希望。


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